声 - テッド・シュワルツ
デイリービューグルのカメラマン。スパイダーセンスで悪者の居場所を探す。

声 - ジョージ・ディセンゾ
レッドスカルに捕まったヒーロー。しかし、それを目撃したスパイダーマンに助けられ、お互いに握手をした。
第18話に登場。

声 - ヴィック・ペラン
いとこのネイモリータが化学物質で汚染されてしまった影響で、ネイモアは地上世界に恨みを持ってトラックなどを押し倒した。そこでスパイダーマンとも戦うことになるが、煙突を持ち上げて投げ込もうとして煙に巻かれて気絶した。スパイダーマンが子供たちに「サブマリナーに水をかけてくれない？」と頼んだところOKを貰い、ネイモアは生き返った。

声 - ジャック・エンジェル
メトロ病院の医師、ネイモリータを救った恩人。

声 - B・J・ウォード
ネイモアのいとこ。魚を探すために海を泳いでいる最中、キングピンの研究室から流出した化学物質に汚染されてしまい、気絶してタコに連れ去られてしまったが、サブマリナーに救われ、ブレイク先生の病院で治療してもらった後、彼女の容態は回復した。

ジェイ・ジョナ・ジェイムソン

声 - ウィリアム・ウッドソン
デイリービューグルの編集長。スパイダーマンの正体を知りたがる頑固な人。ブラック・キャットに少々弱いところがある。

ベティ・ブラント

声 - モナ・マーシャル
デイリービューグルの秘書、本作より黒髪。ピーターからは「ベティ」、ジェイムソンからは「ミス・ブラント」、ジェイムソンには「ジェイムソンさん」と呼ぶ。「Revenge of the Green Goblin」ではハロウィーンの日にピーターから黒い猫をプレゼントされ、とても喜んでいた。

ジョー・ロビー・ロバートソン

声 - リー・ベイリー
スパイダーマンのことをヒーローだと思っており、ジェイムソンの行動には呆れている。過去には、ドクター・ドゥームに捕まって自分の影武者（ロボット）にされたこともある。

モーティマー

声 - 不明
ジェイムソンの甥。ジェイムソンのことは（ロビーと同じく）、ジョナおじさんと呼んでいる。ピーターとはライバルな関係にあり、1話では証拠写真を持ってこれたもののカメラが海に落ちてしまい、写っていた写真は消えてしまった。

ベン・パーカー

声 - ポール・ウィンチェル
ネックレスの幻影として第22話に登場。幻のベンは、「スパイダーマンのせいで眠れない！」とメイに伝えたことがある。

メイ・パーカー

声 - モーガン・ロフティング
スパイダーマンが嫌いな女性、第22話より彼に復讐をするも失敗した。

ドクター・オクトパス

声 - スタン・ジョーンズ
タコ足を付けた悪の科学者。第1話で全世界の石油を奪おうとしたが、スパイダーマンに負けた。

グリーン・ゴブリン/ノーマン・オズボーン

声 - ニール・ロス
第10話に登場。列車の衝突事故でノーマンは、自分がグリーンゴブリンであることを思い出し、スパイダーマンに復讐したが失敗した。

ミステリオ

声 - マイケル・ライ
ニューヨークで大人気ナイトクラブの経営者としてディスコが大好きなファンや常連客を奴隷に変え、スパイダーマンを攻撃させようとした犯罪者。

リザード

声 - コーリー・バートン
セントラルパーク動物園の爬虫類や他の動物を解放させ、爬虫類軍団を結成させるためにニューヨークの街を巨大なジャングルに変えた後、天気を変えるマシンで遊び場を作った。リザード自身の目標は全て達成したがスパイダーマンに負け、爬虫類の動物たちは檻に戻された。

ヴァルチャー

声 - ドン・メシック
NASAの宇宙探査機を求めてた男。ハリーの服を着ていたピーターをハリーと思って連れ去ったことがある。

クレイヴン・ザ・ハンター

声 - ジャック・ドレオン
ジェイムソンの頼みでデイリービューグルのマスコットになったハンター。ザブを捕まえたが、カ・ザールが来た際、ビューグルがタダでカ・ザールと戦わせた。しかし、カ・ザールから自分の檻に叩き込まれて失敗に終わった。

マグニートー

声 - ウォーカー・エドミストン
ニューヨークの発電所から惑星の変圧器を制御不能にさせ、マンハッタンなどの街を暗闇に変えていった。

カメレオン

声 - ジョン・H・メイヤー
変装の達人で、霊媒師メンターに変装してメイを騙した犯罪者。

コリーン

声 - リンダ・ゲイリー
カメレオンの共犯者。彼女が叔母に化ける際、メイに霊媒師のグレート・メンターを紹介した。

キャット・バグラー

声 - ロン・ファインバーグ
スパイダーマンの秘密を知る犯罪者。ベンを殺した泥棒は、彼のいとこ。

サンドマン

声 - アンドレー・スレイカー
砂の能力を持つ犯罪者。もっと強いパワーが欲しいためにNASAから土壌サンプルを盗んだが、スパイダーマンに逮捕された。

ブラックキャット

声 - モーガン・ロフティング
デイリービューグルの新年会に乱入し、参加者の宝石を盗んだ犯罪者。スパイダーマンに挑戦状を送り、貨物船から有名な高級アーティファクト「マルタのネズミ」を盗むと告げたが失敗。マルタのネズミがジョニー・グリフォン・ショーに来ていると知ったとき、それを再び盗もうとしたが、スパイダーマンに捕まり、ニューヨーク警察に連行された。

レッドスカル

声 - ピーター・カレン
精神を取り替える装置を発明した犯罪者。キャプテン・アメリカとスパイダーマンを監禁して2人の精神を入れ替えてから、軍隊を支配しようと企んでいた。結果的には失敗し、レッドスカルは逮捕された。

リングマスター

声 - レジス・コーディック
サーカスの団長。街を混乱させてスパイダーマンのせいにしようと催涙ガスで銀行を襲っていた。

ギズモ教授

声 - レジス・コーディック
ロビンソン教授の元パートナー。ロビンソンが発明したリモコンを盗み、戦車2台を暴走させたことがある。

リチャード・ロビンソン教授

声 - ？
ギズモ教授の元パートナー。

ニーマン博士

声 - ヘンリー・コーデン
レッドスカルの下で働いていた科学者。スカルの命令により、精神転送装置を発明した。

スタントマン/トライアングル・オブ・イビル

声 - ？
ビヨンド・ビリーフショーからダイヤモンドと壺を盗んだ犯罪者。スパイダーマンに綱渡りレースの相手をしてもらおうと挑戦状を送ったが、綱渡りレースにはスパイダーマンが勝ち、トライアングルが負けた。

ゾルタン・アマデウス/ドクター・ブラッドリー・ショー

声 - ジェフ・デヴィッド
スパイダーマンの血液を実験している最中、ブラッドリーは怪人ネフィリア（半分がクモで半分が人間）になった。アラクノイドにも似ているが、本人ではない。

ペニー

声 - ？
ブラッドリーの仲間で、スパイダーマンのDNAを奪った女。

ウィザード

声 - ジョージ・ディセンゾ
反重力の研究をしていた科学者。メデューサからパートナー解消させられそうになり、奴隷の首輪を仕掛けて軍の兵器を盗むよう命じた。

メデューサ

声 - B・J・ウォード
ウィザードのしもべで（洗脳させるための首輪もあった）、スパイダーマンとの関係も持っていた。

キングピン

声 - スタン・ジョーンズ
マフィアのボス。

シルバーメイン

声 - ？
キングピンとの闘いを辞めるためにニューヨークにやってきた犯罪組織のボス。

ハンマーヘッド

声 - ウィリアム・ボイエット
シルバーメインの手下。

ハル・ハンター

声 - ？
キングピンの子分。

シーザー・シセロ

声 - ジャック・エンジェル

マン＝マウンテン・マルコ

声 - ？

エベレット教授

声 - ？
溶解液を扱った最強兵器を発明した科学者。

サイドワインダー/ワイルド・ウィリー・ウィルソン

声 - フィリップ・L・クラーク
ロボットの馬に乗った犯罪者。ロデオ・ショーで黄金の拍車を盗もうと乗り込むが、スパイダーマンに捕まって失敗に終わる。

サイドワインダーの娘

声 - ？
ウィルソンの娘で元パートナー。ウィルソンが犯した罪を明かすための証拠を探すために、ロデオ・ショーで働いていた。

ピエロ

ロデオ・ショーのピエロで、サイドワインダーの手下。

ドクター・ドゥーム/ビクター・フォン・ドゥーム

声 - ラルフ・ジェームス
ドゥームが少年時代の頃にバロンの手下の衛兵に追われていたことがある。丘の中に隠れていたところをボリスが見つけた。ビクター自身は回復したが、父は被爆して死亡している。

ロボット

ドクター・ドゥームのロボット軍団。

ゾルタン博士

声 - ？
ドクター・ドゥームの手下として働いていた科学者。

ゴロン

声 - ？
目に魔法のビームを放つ魔術師。様々な能力でスパイダーマンと戦ったが、スパイダーマンが持った鏡（ソーラーミラー）で跳ね返され、ゴロンはシワシワの爺さんになった。

サリー・ボーモント

声 - ？
NASAから招待されたピーターの同行者。ピーターの失敗には、イライラするほど。

ケイザー

声 - ？
『The Hunter And Hunted』に登場。

事務総長

声 - ？
ドクター・ドゥームが世界中の人々を洗脳させて世界の指導者にしていることを知っていた人物。ドゥームに掴まったが、スパイダーマンに助けられている。

校長先生

声 - ブライアン・カミングス
エンパイアステート大学の校長

ヨハン

声 - ？
ドクター・ドゥームのエピソードに度々登場している。

ウィルバー・モーゼス

声 - ？
第2話に登場。スパイダーマンがアメリカ合衆国の大統領を探すのにモーゼスがフォッカー三葉機でジャージーシティーまで1時間20ドルで乗せて行ったことがある。

カナダでは、モーニングスター・エンターテインメントから「The Vulture Has Landed」をVHS『Spider-Man VS. Vulture』に収録して発売。このビデオには、スパイダーマン1967のエピソード「The Vulture's Prey 」「The Dark Terrors」を収録している。「Canon of Doom」というエピソードもビデオ化されたことがあり、こちらは「The Fantastic Four VS. Doctor Doom」の映像特典として収録。「Arsenic And Aunt May」という回では、主にキャプテン・アメリカの「The Fantastic Origin Of The Red Skull」に映像特典として収録されたこともあるほか、シリーズVHS（カメレオン、メイおばさん、スパイダーマンの3人が表紙となっている）にも収録されている。モーニングスターから発売されているビデオには、1985年にプリズム・ビデオからマーベル・ビデオ・ライブラリー集の一部として発売されたVHSとベータマックスからマスタリングされている。

2008年4月、リベレーション・エンターテインメントは、ジェティックス・ヨーロッパから『スパイダーマン』と他のマーベル作品のビデオソフトの商品化権を獲得。

2009年、Clear Visionが商品権を引き継ぎ、イギリスで全4巻のDVDを2010年6月7日、7月5日、8月2日、2010年9月6日に発売。2011年にはトリプル・パック、2013年3月11日にはコンプリートBOXが発売された。

ドイツでは、Clear VisionからシリーズのDVD全4巻が「スパイダーマン5000」のタイトルで発売された。