声 - モーリス・ラマーシュ（オリジナル版）、緒方賢一（日本語吹き替え版）
本作の主人公。遺伝子操作により天才的頭脳を持ったネズミでいつも世界征服を企んでいる。性格は至って真面目で頑固で堅物で短気で詰めが甘く、あと一歩のところで失敗に終わり、回によっては成功しても何らかで終わってしまう。毎度ピンキーとくだらない漫才をしているが見捨てることなく、彼を大事に思っている。口癖は「ピンキー、お前も私と同じ考えか？」「明日の晩に備えて私は籠に戻って寝るよ」「夜が明けたら明日は今日だ。世界征服を目指すのだ」

声 - ロブ・ポールセン（オリジナル版）、梅津秀行（日本語吹き替え版）
本作のもう一人の主人公。遺伝子操作で人の言葉を話せる程度になったネズミでブレインのドジで天然な相棒。「ナーフ」や「ポイット」という独特な口癖を持つ。ブレインに比べ、世界征服に興味はない為、積極的ではないが親友想いでブレインの一番の理解者でもある。一度だけブレインに匹敵する天才になったことがある。ブレインの口癖に対して「同じだと思うよ」「明日？明日何かあったっけ？」と答えることが多い。ロブは、アニマニアックスのヤッコ役も務めている。

声 - ロディ・マクドウォール（オリジナル版）、楠見尚己（日本語吹き替え版）
ブレインとは幼馴染の関係だったが、現在は宿敵との関係を持ち、ブレインと同じ世界征服を企むハムスター。

声 - ビリー・ウェスト（オリジナル版）、不明（日本語吹き替え版）
『ピンキー＆ブレイン・・・＆ラリー』という回に登場。